弦華生物T7 RNA 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒

貨號:EB0011

英文名稱:T7 RNA Transcription Kit

產(chǎn)品規(guī)格:10T  50T   100T
【產(chǎn)品介紹】

T7 RNA Polymerase是一種源自T7噬菌體的酶，它是一種DNA依賴的RNA聚合酶，具有高度的特異性，僅識別T7啟動子序列。這種酶在分子生物學研究中扮演著重要角色，尤其是在體外轉(zhuǎn)錄和基因表達分析中。T7 RNA Polymerase能夠從含有T7啟動子的模板DNA高效合成RNA，其轉(zhuǎn)錄活性不受真核細胞內(nèi)RNA聚合酶II的啟動子或增強子的影響，因此可以用于精確控制RNA的合成。此外，T7 RNA Polymerase在轉(zhuǎn)錄過程中對模板DNA的親和力高，能夠在較低的酶濃度下實現(xiàn)高效的轉(zhuǎn)錄，這使得它在高通量實驗中尤為有用。

【試劑盒組成】

【注意事項】（操作前仔細閱讀）

1．用于RNA合成的器具須用0.1% DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液37°C浸泡12 h；然后在121°C高壓滅菌20 min去除殘留的DEPC。

2．請使用不含RNA和DNA酶的槍頭、離心管進行實驗。

3．RNA聚合酶和RNA酶抑制劑避免反復(fù)凍融；放置冰上后請盡快使用。

4．實驗時請佩戴一次性手套及口罩以避免產(chǎn)物被RNase降解

5．轉(zhuǎn)錄前請先電泳確定模板為單一片段或模板純度＞90%。

6．進行體外轉(zhuǎn)錄合成 RNA 時，本產(chǎn)品不僅適用于含有 T7 promoter 的線性plasmid，也適用于帶有 T7 promoter序列的PCR 產(chǎn)物、oligo DNA等。

7．如遇轉(zhuǎn)錄效果不佳，可自行多加RNase Inhibitor或?qū)?/span> EnzymeMix 稀釋2-4倍使用，（注:試劑盒中帶有陽性對照轉(zhuǎn)錄模板，加入量為1μl/20μl體系）。

8．本產(chǎn)品僅供科研使用。

【標準轉(zhuǎn)錄步驟】

1．將除EnzymeMix和RNase Inhibitor 外的組分振蕩混勻，短暫離心收集于管底，冰上儲存?zhèn)溆谩?/span>

2．將四種核苷酸分子等比例配成rNTPs預(yù)混液。配置好的預(yù)混液可在-20℃放置2個月。

3．按下表配制反應(yīng)體系（也可根據(jù)實驗需求按照此加入配比等比例擴大或縮小總體系），建議模板加入0.1-1 μg（注：加入各轉(zhuǎn)錄組分時請最后加入轉(zhuǎn)錄模板）。

4．用移液器輕輕混勻各組分，并短暫離心收集，37°C孵育3 h。

【存儲及保存】

存儲緩沖液：20 mM pottasium phosphate buffer, 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA,1 mM DTT, 50% (v/v) glycerol, pH 7.5 25oC。

T7 RNA Polymerase Buffer (5*)：600 mM HEPES-KOH(pH7.6), 120 mM MgCl2, 200 mM DTT, 10 mM spermidine。

弦華生物T7 RNA 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒【存放說明】

-20oC保存，至少一年有效。可以分裝后在-80oC長期保存。